【摘要】 目的 研究不同功率下高频电流对根管内粪肠球菌的灭菌作用，以期探讨高频电流是否适用于根管内杀灭粪肠球菌及适宜的高频电流功率数值，为下一步临床应用提供实验依据和打下一定的研究基础。方法 选取离体单根管前磨牙共60颗，分成对照组和5个实验组，实验组分别为氢氧化钙组、高频电流5 W组、10 W组、15 W组、20 W组，每组10颗牙齿。所有牙齿去除牙冠保留牙根长度15 mm，去除牙髓，扩通根管至40号。对照组根管内接种菌液4微升后不做任何处理，用无菌纸尖将其吸出。实验组根管内接种菌液4微升后，氢氧化钙组封药尖消毒1周，取出药尖，再向根管内加生理盐水，用无菌纸尖将其吸出。高频电刀组分别用高频电流5 W、10 W、15 W、20 W功率进行灭菌处理，再向根管内加生理盐水，用无菌纸尖将其吸出，所有纸尖分别溶于1 ml生理盐水后，振荡均匀，取溶有粪肠球菌的生理盐水进行平板计数，24 h后，计数菌落形成单位。结果 对照组与所有实验组比较， P<0.01，所有实验组菌落计数结果与对照组均有差异。氢氧化钙组与5 W组比较，P>0.05，菌落计数结果无差异。氢氧化钙组与10 W、15 W组、20 W组比较， P<0.01，菌落计数结果均有差异。结论 氢氧化钙和不同功率的高频电流对根管内粪肠球菌均有较好的杀灭作用。在功率10 W、15 W、20 W时，高频电流对根管内粪肠球菌的灭菌效果优于氢氧化钙。高频电流的功率与灭菌效果成正比，随着功率的增加，灭菌效果明显增加。在20 W时几乎可完全杀灭粪肠球菌。

　　【关键词】 高频电流；根管灭菌；粪肠球菌

　　粪肠球菌是根管治疗失败后再感染根管内最常检测到的细菌。由于粪肠球菌能够在根管长期饥饿环境中生存，对抗菌药具有耐药性，同时能耐受强碱，传统的根管消毒剂氢氧化钙无法完全消灭粪肠球菌。近年来杀灭根管内粪肠球菌成为学者们关注的热点问题，找到消除粪肠球菌的方法是促进根管再治疗成功的关键。本研究旨在探讨不同功率下高频电流对根管内粪肠球菌的灭菌作用，为进一步临床应用打下一定的研究基础。

　　1 资料与方法

　　1.1 一般资料

　　本实验主要材料有1411改进型小型高频电刀（上海高科技公司）、高速涡轮牙钻机（上海医疗器械股份有限公司，CS160型）、XW-80A旋涡混合器（上海医科大学仪器厂）、电热恒温培养箱（上海跃进医疗器械厂）、Eppendorf微量移液器和适配标准吸嘴（德国艾本德股份公司）、微量进样器（上海医疗激光仪器厂）、粪肠球菌ATCC29212（广东省微生物研究所微生物菌种保藏中心）、营养肉汤和营养琼脂成品干粉培养基、ROEKO氢氧化钙药尖（瑞士康特）、吸潮纸尖（天津达雅鼎医疗器械有限公司）。

　　1.2 方法

　　选择因正畸或牙周病原因拔除的成人下颌单根管前磨牙60颗，全部进行X线检查（确保无隐裂等情况）。用超声波洁治仪处理干净牙齿的外表面，用冷水喷雾的高速金刚砂钻去除牙冠，牙根统一成标准长度15 mm。拔除牙髓，用不锈钢K锉通畅根管至40号，复合树脂封闭根尖孔，浸泡于4℃生理盐水中保存备用。将真空冻干的标准粪肠球菌菌株复苏，移植于斜面培养基上，37℃培养。经两次传代培养后，粪肠球菌开始正常生长。挑取正常生长的粪肠球菌菌落移植于液体培养基中培养备用。将60颗牙随机分成6组，对照组、氢氧化钙组、高频电刀功率5 W组、10 W组、15 W组、20 W组，每组10颗牙。所有牙分别放入试管中和其他实验材料进行121.3℃、1 mPa高温高压灭菌30 min。将粪肠球菌菌液放在漩涡混合器上，振荡均匀，取100 μl菌液，用生理盐水稀释至1000 μl，作为根管内接种用菌液。用10 μl微量进样器取4 μl菌液滴入每个根管内。对照组菌液滴入后，不做任何处理，用无菌纸尖将其吸出，将纸尖放入盛有1 ml生理盐水的EP管内。氢氧化钙组加入4 μl菌液后，在氢氧化钙药尖上标记好工作长度，然后用镊子将药尖送入根管直到根尖，最后用氧化锌丁香油糊剂暂封。1周后，去除暂封物，取出氢氧化钙药尖，滴入生理盐水4 μl后振荡均匀，用无菌纸尖将其吸出，将纸尖放入盛有1 ml生理盐水的EP管内，振荡均匀，取EP管内混合液做平板计数。其余四组菌液滴入后，按预定实验条件高频电刀功率分别调至5 W、10 W、15 W、20 W，将电极插入根管内，电流每次输出时间为3 s，间隔5 s，连续输出5次进行灭菌处理。处理后取出电极，微量进样器再次取4 μl生理盐水滴入根管内，振荡后用无菌纸尖将液体吸出后，将纸尖放入盛有1 ml生理盐水的EP管内，振荡均匀，取EP管内混合液做平板计数。应用SPSS 17.0统计学软件，采用单因素方差分析比较对照组与实验组之间的菌落计数结果，进一步两两比较采用Tamhane检验方法。

　　2 结果

　　做单因素方差分析，P<0.01有统计学差异。方差齐性检验，P<0.01，方差不齐。进一步做两两比较采用Tamhane检验方法。

　　2.1 对照组与所有实验组比较， P<0.01，所有实验组菌落计数结果与对照组均有差异。可以认为无论是氢氧化钙还是高频电流对粪肠球菌均有杀灭作用。

　　2.2 氢氧化钙组与不同功率的高频电流组分别做比较：氢氧化钙组与5W组比较，P>0.05，菌落计数结果无差异，可以认为氢氧化钙与5W的高频电流对粪肠球菌的灭菌效果无差异。氢氧化钙组与10W组比较，P<0.01；氢氧化钙组与15W组、20W组比较，P<0.01，菌落计数结果均有差异，可以认为10W、15W、20W的高频电流对粪肠球菌的灭菌效果优于氢氧化钙。

　　2.3 不同功率的高频电流组之间比较，P<0.01，所有功率的高频电流组之间均有差异，可以认为随着功率的增加，高频电流对粪肠球菌的灭菌效果也有增加。

　　3 讨论

　　本实验选用粪肠球菌作为感染细菌，主要是由于粪肠球菌被认为是感染根管中最难去除的菌种之一。粪肠球菌在难治性根尖周炎根管中最高分离率可达77%，是目前评价各种感染清除措施时最常用的目标菌种。有研究显示粪肠球菌在实验动物的根管中不需其他细菌的支持单一培养也可存活6个月。有研究在体外培养粪肠球菌时发现，粪肠球菌在水中可以存活4个月以上。粪肠球菌本身对头孢菌素、氯林可霉素有耐药性。有学者报道粪肠球菌对青霉素、强力霉素、红霉素、氯霉素等也有耐药性。粪肠球菌高效多重的耐药性可能是根管内生物膜的形成使抗菌剂无法发挥作用以及细菌间耐药性传递引起的。粪肠球菌能抵抗氢氧化钙，大多数根管内的细菌在pH为9.5的环境下已无法存活，强碱会破坏细菌的细胞膜，粪肠球菌却能耐受强碱，在pH为11.5的环境中也能存活。由于粪肠球菌的这些特性，传统的消毒方法均只能减少粪肠球菌的数量，但是无法完全去除。粪肠球菌作为一种顽固性细菌，高频电刀对其有很好的杀灭作用。高频电通过干燥、电凝、电灼等热效应使蛋白质变性、凝固、坏死直至碳化，从而达到灭菌，清除毒素的作用。因高频电刀所具有的消毒原理使高频电刀作为一种物理消毒灭菌的方法，不仅仅对粪肠球菌具有杀灭作用，对其他的细菌毒素也是有作用的，高频电刀是一种较为理想的根管物理消毒灭菌的方法。

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